当前位置:首页 > 技术文章
技术文章
  • 19 2020-3
    SDS-PAGE 蛋白质样品的制备

    将收集的各样品加入等体积的2×SDS-PAGELoadingBuffer,煮沸裂解5min,冰浴2min,12,000rpm离心10min,取上清-20℃保存备用。SDS-PAGE蛋白质电泳(参照分子克隆实验指南操作)(萨姆布鲁克,2002)1)按照电泳装置的使用说明,装好洁净干燥的玻璃板。2)分离胶的制备按下列成分配制10mL12%分离胶:ddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5MTris(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMED3.3mL4.0mL2.5m...

  • 18 2020-3
    蛋白质含量测定法

    蛋白质含量测定法,是生物化学研究中zui常用、zui基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度zui高,比紫外吸收法灵敏10~20倍,比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。值得注意...

  • 18 2020-3
    蛋白质的表达、分离、纯化实验

    蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。实验材料:大肠杆菌BL...

  • 18 2020-3
    病毒感染细胞实验整体流程及原理

    目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。1、病毒的种类病毒有很多种,常见的有慢病毒和腺病毒1.1慢病毒1.1.1原理慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA/miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难...

  • 18 2020-3
    Western blot 详细操作步骤

    一个基因表达zhong极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除ELISA法外,也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意,故本法遂被延伸称为Western(西)印迹法,该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出与专一抗血清结合的专一性蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶上分辨出的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上并与第1抗体共孵。第1抗体专一地与待分离蛋自质的抗原决定...

  • 18 2020-3
    ELISA 步骤、试剂及注意事项

    操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1...

  • 16 2020-3
    细胞周期测定实验

    细胞计数法:实验方法原理体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有1定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比,它是测定细胞周期的1个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。实验材料细胞试剂、试剂盒胰酶甲醇培养液冰醋酸Giemsa染液仪器、耗材CO2培养箱普通显微镜培养皿盖玻片吸管实验步骤1、消化细胞,将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。二、CO2培养箱中培养48小时,使细胞长在盖片上...

  • 16 2020-3
    细胞增殖检测:MTT 法

    MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-diphenytetrazoliumromide,MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含...

Contact Us
  • 联系QQ:277124344
  • 联系邮箱:277124344@qq.com
  • 联系电话:13760660301
  • 联系地址:广州市天河区明旭街5号

扫一扫  微信咨询

© 2020 广州市超博科技有限公司 版权所有  备案号:粤ICP备19162636号

技术支持:化工仪器网    管理登陆    GoogleSitemap

服务热线
13760660301

微信服务号