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技术文章
  • 29 2020-7
    细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

    一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;(2)血清质量不好,反复冻融的结果;(3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应...

  • 29 2020-7
    如何避免血清中产生沉淀?

    按如下操作可避免沉淀的产生:(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。(2)血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。(3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。(4)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。(5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。(6)若必须做血清的热灭活,请遵...

  • 7 2020-7
    DNA 的提取

    一、原理采用碱变性发抽提取质粒DNA。该法是基于染色体DNA与质粒DNA的变性预复性的差异而达到分离目的的。在PH大于12的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离,当以pH5.2的乙酸钠高盐缓冲液调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复到原来的构型,保存在溶液中。而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构。通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA,蛋白质-SDS复合物等一起沉...

  • 6 2020-5
    细胞冻存步骤的专业实验流程

    我们知道,在细胞培养检测实验在实验仪器、培养基等等工作上都要耗费不少的人力和体力。好在很久以前就有高人发明了细胞保存这个实验步骤,将暂时多出来的细胞冰冻保存,以极大程度保存细胞活力。一、细胞冷冻保存1.材料:生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene5000-0020)、0.4%(w/v)trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)2.冷冻...

  • 6 2020-4
    解析LncRNA调控肿瘤糖酵解重编程的作用及机制

    1AGPG被鉴定为作为代谢相关的LncRNA为了发现对ESCC发育有显著影响的致癌LncRNA,我们首先从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中鉴定出在ESCC组织中表达高于成对相邻正常组织的LncRNA。然后,我们根据log2差异倍数对这些LncRNA进行分类。接下来,我们建立了一个siRNA库,对于siRNA进行筛选,这些siRNAs还包含了TARGETplus上的专有双链化学修饰,以确保zui佳的链负载和干扰类似microRNA的种子活性,从而减少非目标效应。为了确定可能改...

  • 6 2020-4
    肾脏电解质排泄的昼夜调控-旁分泌因子的作用

    1、肾脏生物钟和近日生理学我们早就知道,人体肾脏生理的一些参数在一天24小时内都遵循特定的昼夜节律(如图1所示)。1950年,Sirota等人就招募了18名健康成年人,对肾功能的日变化进行了初步的探索,研究结果表明与白天相比,夜间的排尿量明显减少。此后不久,Mills和Stanbury进行了另一项研究,他们对健康的成年受试者进行12小时的特定训练来代替正常24小时模式,结果发现尿钠和尿钾的日排泄不受以12小时为周期的进食、饮水和睡眠模式的影响017年诺贝尔生理学或医学奖授予了...

  • 6 2020-4
    综述| J HEMATOL ONCOL:肝癌代谢中的circRNAs

    能量代谢的重编程是由基因组不稳定引起的肿瘤的1个标志。在肿瘤进展中广泛存在的代谢紊乱为癌细胞的生长和分裂提供了必要的来源。与正常成人组织相比,肿瘤内的碳水化合物、脂质和氨基酸代谢可能发生显著的转化变化(图1)。公认的癌症相关的代谢变化包括:葡萄糖和氨基酸摄取失调、利用营养获取的机会模式、利用糖酵解/三羧酸循环(TCA)、用于生物合成和NADPH生产的循环中间体,以及对氮需求的增加。研究肿瘤异常代谢的机制对制定有效的肿瘤治疗策略具有重要意义。这些能量代谢的重新定向是由蛋白质和非...

  • 6 2020-4
    NAT MED:绘制肿瘤细胞系代谢图谱

    1从培养的CCLE细胞系中提取代谢产物体外培养20种主要癌症类型的928个癌细胞系,用于124种极性代谢物和101种脂类的代谢组学分析(图1a)。使用层次聚类来评估细胞系之间的代谢相似性。两个主要的聚类与造血系和非造血系有很强的相关性,表明这两组的主要代谢是有差异的(p1×10−10,Fisher’s确切检验)。为了进一步量化代谢物水平(y)与主要癌症谱系(X)的关系程度,采用线性回归模型进行分析。结果表明,225个代谢物中有148个的谱系...

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