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IP、co-IP、pull-down?

发布时间:2020-12-09浏览:49次

某个实验间隙…

萌新:开题报告已提交,转眼1个月过去了,实验还是一头雾水,为啥我的co-IP拉不下来蛋白?

奋斗中的师兄:我当初正好相反,拉下来的蛋白被抗体条带覆盖住了,换个抗体忒不好找,无奈换了个蛋白,还好挺顺利。

久经沙场的大师兄:蛋白吧,不但种类多,理化性质差异较大,关键它们又喜欢组队在细胞里干活,co-IP又是常用的手段,掌握好这个工具还是很重要的,总不能随随便便就换个蛋白。

 IP、co-IP、pull-down简介

IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法。

 

 Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀: co-IP是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本实验流程和IP类似,通过使用诱饵蛋白(IP中的抗原,bait protein)特异性抗体间接捕获与其结合的靶蛋白(prey protein)。

 

Pull-down:另外一种进行蛋白-蛋白相互作用研究的方法,针对无法找到可用的抗体的靶蛋白。可以采用一个表位标记标记蛋白质(可在细胞内组成型表达),将其固定在基质上获得互作蛋白。很多蛋白质由于无法找到可用的抗体而无法进行免疫沉淀。

 

 

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