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CB-如何让活细胞成像的荧光信号明亮且稳定?

发布时间:2020-12-08浏览:117次

       活细胞荧光成像往往需要更长时间的观察和拍摄,对荧光信号的持久稳定要求更高。这就需要研究者要选用更明亮更稳定的荧光染料,如Invitrogen™ Molecular Probes™ 荧光标记试剂,同时尽可能优化实验条件。除此之外,提高活细胞成像的信噪比还可通过使用能减少细胞外背景荧光或增加标记荧光染料光稳定性的试剂进行信号优化。

降低背景荧光

    活细胞成像实验中非常重要的一点是需要在专门的培养基中进行成像。常规培养基含有酚红可淬灭可见光波段的荧光染料,或含有自发荧光成分如核黄素等,都降低了信噪比。推荐使用活细胞成像培养基如Gibco™ FluroBrite™ DMEM或基于HEPES的Live Cell Imaging Solution,既能保持细胞健康同时又能大可能的降低或消除背景荧光。

 

No.01FluoroBrite™ DMEM培养基

      是一种基于DMEM配方的培养基,其背景荧光与PBS相当,与普通无酚红DMEM培养基相比,其背景荧光降低了90%,同时赋予细胞健康生长所需的营养。

 

No.02Live Cell Imaging Solution

      一款由Molecular Probes专为活细胞成像应用开发的光学透明的溶液,适用于成像观察、染料标记和细胞洗涤多个步骤,可帮助细胞保持健康长达 4 小时。

 

No.03BackDrop™ 背景抑制剂

      添加专门的与活细胞兼容的背景抑制剂也有助于减少细胞背景荧光。Invitrogen™ BackDrop™ 背景抑制剂(货号B10512)适用于在蓝色、绿色或红色荧光通道中观察到高背景信号或弱目标荧光信号时,可大大提升信噪比,且无需洗涤。

 

 

 增加荧光基团稳定性

       当荧光基团被频繁曝光或长时间照射时,往往会发生降解,降低荧光信号强度,同时产生自由基单线态氧进一步降解临近染料分子,从而可能造成荧光信号损失。加入的活细胞抗淬灭试剂ProLong™ Live(货号P36974)可显著增强荧光基团的光稳定性。

 ProLong Live可有效增强多种荧光基团稳定性,成像时间延长50% 以上。

 

nvitrogen™ ProLong™ Live抗淬灭试剂含有来自天然大肠杆菌质膜的酶,只在细胞外工作而不进入胞内,几乎不影响细胞活力、细胞增殖及各种细胞功能,且使用便捷:

✔ 适用多种荧光基团:荧光蛋白, Hoechst, MitoTracker等

✔ 直接滴加即可,稳定信号长达48h以上

✔ 对各种细胞功能无影响

✔ 可兼容任何培养基、缓冲液等

      除此之外,活细胞成像实验中也要综合优化多种实验条件以获得蕞嘉信噪比,如选用合适稳定的荧光基团(Ex/Em与荧光显微镜匹配),兼顾实验总时间、拍照频率及荧光通道数等,上机观察时仪器参数设置、调整光照时间和光照强度等等都要考虑。

 

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