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干货 | 培养液选配 7 个关键点,太实用了!

发布时间:2019-10-16浏览:179次

                                        干货 | 培养液选配 7 个关键点,太实用了! 
                                                               作者:毛博 
培养液是人工模拟细胞体内生长的生存环境,对于细胞培养起着关键性作用。在这方面,毛
博(文章作者)走了弯路之后得到一些宝贵的经验和教训,都是来自实战一线的干货,字字血声声泪, 先贡献给大家。 
  

 
                                                  培养基,原配的总是合适的 
 
选择培养基没有一定的标准,某种培养基可以适合多种细胞,某种细胞也可以在不同培养液
中生长。但是,建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞first choice培养基。可以查阅
参考文献,或在购买细胞株时咨询。例如,小鼠细胞株多选 1640;进行细胞杂交,基因转移 实验,可选择 IMDM。 另外,本实验室用惯了的培养基不妨一试。这些都是师兄师姐们用 了几十年了。肯定好用的。  
  
                                            1640 还是 DMEM,取决于你发文章的决心 

 

1640 的确是非常便宜的培养基,也很好用。所以在国内的实验室中,用的非常非常多。但 是,它的缓冲力弱,所以有时会对细胞的生长状态有影响,尤其是一些实验室长期传代状 态不好的细胞。所以,毛博很败家地推荐:为了早点出文章,有条件还是用 DMEM,当然不 是昂贵的 GIBCO 公司的,实在是太贵了。HYCLONE 的砍砍价,干粉很便宜,但是明显杂质和 质量不如 GIBCO。一分价钱一分货。真的是真理哈。 
  
                                                         2 到 3 周的量,多了也是浪费 
 
一旦在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,应该在 2 到 3 周内用完它。因为,一些抗生素 和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。2-3 周后就降解完了。所以,一次少配一点,就 不要偷懒了。 
  
                                                                    慎用碳酸氢钠 
 
培养基的 pH 值随着碳酸氢钠量的增加,呈抛物线增长,当碳酸氢钠加到一定量时,pH 变化 越来越小。而培养基的渗透压值随着碳酸氢钠量的增加,呈直线增长,碳酸氢钠量越大,渗
培养基变成了高渗溶液,细胞会脱水萎缩滴。 
  
                                                                     血清分装防膨胀 

必须贮存于–20 ~ -70℃,若存放于 4℃,如同第三条所说的,2~3 周就降解了。教大家一 个小窍门:可将 1 瓶 500ml 的血清,每次 40~45 ml 分装于无菌 50 ml 离心管中,由于血清 结冻时体积会增加约 10 %, 必须预留此膨胀体积 5~10ml,否则会把离心管冻裂滴。  
  
                                                                  血清解冻,慢是王道 

血清的解冻和细胞的解冻正相反:细胞是越快越好;血清是越慢越好。血清解冻步骤: -20℃ 或–70℃冰箱拿出来,放到 4℃冰箱,放一天。在这一天中,时不时地去摇晃一下,使温度与 成分均一,减少沉淀的发生。一天过后,拿出来放到室温下,等血清恢复室温了,再分装。  
 
                                                                  热灭活?别上它的当! 
 
掌握一条原则:除非必须,一般不要热灭活,因为会造成沉淀物显著增多,且会影响血清的 品质。这些沉淀物在显微镜下观察,像是“小黑点”,常常误以为是血清遭受污染,又去过滤 呀什么的,无端增加没有必要的工作量。这里毛博提醒大家:一般不要热灭活。 

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