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让细胞培养不再为难新手

发布时间:2019-10-16浏览:197次

                                                                  让细胞培养不再为难新手

                                                                       作者:毕老师 


细胞培养起初对于我这种“女汉子”性格的人来说,着实是枯燥的工作,因为面对的细胞, 它不会说话不会笑不能对你有任何回应,而且对于喜欢外科喜欢拿刀的我来说,细胞培养更 像是个内科医生做的事情,每天换液就如同换药,它污染了就需要上各种抗生素来“抢救” 它。。。。。。可是随着一天天的相处,一天天的用心体会,我渐渐发现原来细胞培养也是一项
十分有意思的工作,下面将我的一些经验分享给大家。 
 
换液: 
 
从培养箱中取出培养瓶; 
 
用吸液管将瓶的废液全部吸出(在培养瓶的左下角吸走液体,勿接触细胞),吸管丢弃。 
 
更新吸液管,从培养液贮存管中吸取新培养液,加入培养瓶,注意哦,千万不要直接冲洗细
胞,细胞们都娇滴滴的,容不得半点“风吹雨打”。吸出废液至加入新液之间一般不超过 5-10 秒钟,以免细胞因干燥而死亡。 
 
保留该吸管(节省一根是一根),用于吸取下一轮需要换液的同源细胞的废液,注意一定是
废液。 (同源细胞、无污染的几个培养瓶可用同一根吸管吸走或加入培养液。) 
 
  先换生长速度慢的细胞,再换生长速度快的(这似乎和我们平时“早起的鸟有虫吃”的原 则不同,长得快的要后吃饭,嘿嘿);先换无污染的,再换有污染的。 

微生物污染处理: 
 
  每天到实验室,肯定是看我的“心肝宝贝儿”——细胞,害怕的事情莫过于 发现细胞污染了,那种心情就像母亲每天醒来看自己的孩子,结果发现孩子生病了一样焦急
难过。如何发现细胞污染呢?首先要在取出细胞后,先观察一下培养液的颜色,如果培养液 都能看出污染了,那这个细胞基本就无药可救了。 
 
  培养液肉眼看着正常,细胞就一定正常吗?答案是否定的。关键的还是要通过我们的
必备神器——显微镜来观察,下面给大家看一些细胞污染的图片: 

  有微生物污染的一般均丢弃。如污染不严重而该细胞株较重要,则可试行治疗如下:尽
量吸净原培养液装在有盖的小瓶子里,盖好;用过吸管放桌下收集有污染物品的盒子里;用
Hanks 液或培养液洗涤 2 次(环形摇晃几周,再将液体吸走,放在有盖的瓶子里);加入抗生
素。如为霉菌污染,则加抗霉菌素—两性霉素 B(Fugzone)终末浓度为 2.5 ug/ml。预防量减
半。 

  细胞污染不于细菌等微生物,当同时培养多种细胞,细胞与细胞间也会发生交叉污
染,这个时候我们可以用遗传霉素(Geneticin)终末浓度 100 ug/ml,如保存液为 1:30,则
在培养瓶/皿中每 3 ml 培养液加 0.1 ml Geneticin。 
 
单纯传代步骤: 
 
以 25 cm2 培养瓶(6 ml)为例,用 5 ml 吸管将原培养液吸出; 
 
用 2 ml 吸管吸取 D-Hanks 液 2 ml(12.5 cm2 培养瓶和 6 皿板用 1 ml)加入培养瓶,以洗清
血清,轻晃几次后吸出; 
 
用 2 ml 吸管吸加 TE 1/2(Trypsin 0.025% + EDTA 0.01%)2 ml,轻晃使之到达每个角落(一定
要照顾到各个角落啊,即使是冷宫的细胞娘娘也要照顾到),放入 37 °C 水浴,使贴皿细胞脱
落。 
观察时见细胞基本浮起,用 2 ml 吸管加 0.2 ml 血清中和,吸出瓶中的液体及细胞(即 2.2 
ml)。如按照 1:4 稀释传代,则 0.5 ml 传代(1.5 ml 保存或丢弃)加至 15 ml 离心管。该吸管
可保留再用。 

取等量的离心管作配对,进行离心(5 分钟,标记 60 处,即 1000-1500 转/分); 
 
离心后用上一步骤保留的吸管将离心管中的上清液吸走;换一根 5 ml 吸管,吸取 6.5 ml 培
养液,加 5.5 ml 至培养瓶(12.5 cm2 培养瓶则吸取 4.0 ml 培养液,加 3 ml 至培养瓶),加 1 
ml 至离心管,用巴氏管适度吹打 5 次,全部吸出,水平横持巴氏管滴入培养瓶,保留 1-2 滴
加入血球计数板作计数。 
 
将培养瓶置于培养箱。 
 
  以上都是常规的操作,也是每个科研狗每天都要面对的工作,貌似枯燥无味,实则妙趣
横生,只要用心你会发现其实别有洞天。 
 

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