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小鼠骨髓瘤细胞

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小鼠骨髓瘤细胞

细胞的冻存方法
1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。

2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达5×106/ml,离心去上清,吸入离心管中。

3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。

4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。

5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,以防液氮浸入后,融解时因受热发生爆炸伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小牌,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找。
小鼠骨髓瘤细胞

细胞复苏的方法
1.从液氮罐中取出安剖;有时因安剖未封严,浸入了液氮,取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸,因此应带有防护眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上盖并不时摇动,尽快解冻。
3.剪开纱布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,净化台上打开盖,用吸管吸出细胞悬液,装入离心管中,再补加10ml培养液,吹打使细胞悬浮。
4.低速离心(500~1000转/分)5分钟,取上清后再重复用培养液漂洗、离心。
5.加入培养液适当稀释后,再移装入培养瓶中,置温箱培养,次日更换一次培养液后再继续培养。

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