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看看这篇文章,学习下细胞培养板的操作步骤

发布时间:2023-01-15浏览:50次

  细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则,各项操作要保证规范、科学,不对细胞的生长造成额外的影响。这其中最常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。
 
  细胞培养板的操作步骤:
 
  1、加样品:将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔),将待检血清用PBS或生理盐水按1:20稀释后取10ul加入反应孔内。
 
  2、加对照:加入阴性对照1-3孔,阳性对照1孔,各100ul对照血清。空白对照1孔空置。
 
  3、温育:将反应板震荡使样品混匀后,置37℃温箱或水浴反应20分钟。
 
  4、洗板:用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。(1)手洗:将反应板孔内容物倾出,将洗涤液注满反应孔,放置30秒钟后用力甩去,如此重复5次后拍干。(2)机洗:5次,每孔注入洗涤液200ul或注满,停留30秒钟后吸尽拍干。
 
  5、加酶标工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液,置37℃温箱反应20分钟后,洗板5次,洗板操作同步骤4。
 
  6、显色和终止反应:将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内,37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。

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