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技术文章
  • 20 2020-3
    质粒 DNA 的提取

    质粒DNA的提取一、原理采用碱变性发抽提取质粒DNA。该法是基于染色体DNA与质粒DNA的变性预复性的差异而达到分离目的的。在PH大于12的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离,当以pH5.2的乙酸钠高盐缓冲液调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复到原来的构型,保存在溶液中。而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构。通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA,蛋白质-SD...

  • 20 2020-3
    染色质免疫共沉淀(ChIP)

    染色质免疫共沉淀(ChIP)染色质免疫共沉淀可以:(1)组蛋白修饰酶的抗体作为“生物标记”;(2)转录调控分析;(3)药物开发研究;(4)DNA损失与凋亡分析。1实验方法原理:在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“proreinA”特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精...

  • 20 2020-3
    凝胶迁移实验(EMSA)

    凝胶迁移实验(EMSA)凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。1实验方法和原理凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoreticmobilityshiftassay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术zui初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RN...

  • 20 2020-3
    DNA 亚硫酸氢盐修饰和纯化操作步骤

    1DNA亚硫酸氢盐修饰和纯化操作步骤修饰设计:使用CpGenomeTMkit使胞嘧啶转化为尿嘧啶的步骤如下。中等温度碱性pH下使DNA变性成为单链形式暴露出碱基。试剂一,一种包含亚硫酸氢根的钠盐,可使未甲基化的胞嘧啶磺化和水解脱氨,产生一种尿嘧啶磺酸盐中间产物。然后DNA在另一种盐﹙试剂二﹚存在的条件下与一种微粒载体﹙试剂三﹚结合,并通过重复离心和在70%的乙醇中重悬浮脱盐。向尿嘧啶的转化是通过在90%的乙醇中反复碱性脱磺酸基作用和脱盐完成的。DNAzui终在TE缓冲液中通过...

  • 19 2020-3
    双向电泳操作步骤及相关试剂配制

    双向电泳操作步骤及相关试剂配制A.实验过程一、实验原理:2-DE的第1向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离,第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同,而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。二、实验步骤:1.样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg,加入300μl裂解液(1mg蛋白:100μl裂解液)振荡器上振荡10min左右,共处理一个小时。其中每隔10~15分钟振荡一次,然后13200rpm离心15min除杂质,取...

  • 19 2020-3
    免疫组化操作步骤

    免疫组化操作步骤(一)、仪器设备1.18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.2.水浴锅(二)、试剂1.PBS缓冲液(ph7.2―7.4):NaC137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,KH2PO41.4mmol/L.2.0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液(CB,ph6.0,1000ml):柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。3.0.5mol/LEDTA缓冲液(ph8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA&8226;2H2O,用10mmo...

  • 19 2020-3
    免疫共沉淀 Co-IP 实验操作步骤

    免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤一、原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为ji础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的proreinA预先结合固化在argarose的beads上,使...

  • 19 2020-3
    等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

    实验原理等电聚焦(Isoelectricfocusing,简称IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差0.001pH单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作简便迅速,在生物化学、分子生物学及临床医学研究中得到广泛的应用。蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的pH环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动,在小于其等电点的pH环境...

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