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U937细胞高效率转染条件分享

发布时间:2021-08-24浏览:67次


U937细胞高效率转染条件分享


一、转染材料准备

1. 转染试剂用量10ul

2. DNA/siRNA浓度:电讯

3. 细胞密度:1*106-1*105

4. 转染用培养板:6孔板

5. 转染试剂:zeta life ,Advanced DNA RNA转染试剂;货号:AD600025

6. 转染时间:15小时

7. 细胞培养胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清

8. 细胞冻存液:L0100无血清细胞冻存液


注意:本细胞转染用量条件不适合lipo使用。





操作过程:

1.提前1接种细胞细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染。

2. 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合,用移液器吹打、混匀,室温静止15分钟。

3.在细胞培养基加入核酸复合物根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基里面可以含有血清。

4.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。

5.分析结果质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。

 




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