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美丽的 ELISA,你的考验我懂

发布时间:2020-03-24浏览:133次

作者:毛博

酶联免疫吸附实验,简称为 ELISA。正好是一个美丽的女孩的名字。日本有位女艺人野田绘

理纱,英文名字就叫 Elisa

694ELISA 实验是一种非常经典的免疫学实验。虽然历史非常悠久了,但是还是不断地在临床和

基础研究中得到应用。其主要用于:免疫酶染色各种细胞内成份的定位;研究抗酶抗体的合

成;显现微量的免疫沉淀反应;定量检测体液中抗原或者抗体成份。毛博做过一段时间的

ELISA,总结了一些经验教训。毛博还是采用一贯的套路:问题,可能的原因,解决方法。供

大家参考。

问题 1阳性与阴性不能达到 2.1 的比值,阴性颜色太深。

可能的原因:

阴性对照(也就是阳性对照的除目标抗原外的其它成分)中有某种成分与一抗作用。

解决的方法:纯化抗原除去干扰成分。

695问题 2阳性与阴性不能达到 2.1 的比值,阳性颜色太浅。

可能的原因3 个:

1)一抗效价不好。

2)抗原太稀。

3)封闭时间过长。

解决的方法:

1)换用一抗或增加一抗用量。

2)增加抗原浓度。

3)缩短封闭时间,封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时,或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长

了。

问题 3增加抗原浓度,一抗浓度不变,显色反应没有表现出应有的梯度。

可能的问题: 一抗与抗原的比例已经饱和。

解决的方法: 增加一抗用量; 或在一抗用量不变的情况下减少抗原浓度做梯度。

问题 4增加一抗浓度,显色反应没有表现出应有的梯度。

可能的原因:一抗与抗原的比例已经饱和。

解决的方法:增加抗原用量;或在抗原用量不变的情况下减少一抗浓度做梯度。

696问题 5加完 TMB 显色后颜色梯度很明显,但加了硫酸终止反应后颜色梯度没有那么明

显了。

可能的原因:硫酸可能把其它成分都炭化了。

解决的办法:加少一点硫酸,参考值:50 μlTMB+35 μl 硫酸;或者采用 1M HCL 作为终止

液,50ulTMB+50ul1M HCL

毛博认为:这些步骤里面,一抗和封闭是两个关键。如果 ELISA 做不出满意的结果,首先应

该从这两个方面改进。Elisa 实验看似简单,其实不然。别小瞧了这个美丽的女孩子哟。光是

一个加样就有很多讲究。

ELISA 中加样须注意如下问题:

吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可 90 度向孔中滴加液体,这样会

导致液体残留在吸头上,加样不准确!

不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起

来,加样不准确!

正确的加样方法应为 45 度,吸头贴着孔壁加入,应注意:

角度太小,会使液体残留在孔壁上,导致加样不准确!

吸头应当贴着管壁和液面的交界处!

697综上所述,Elisa 实验看似简单,其实还是有很多细节需要我们注意的。以上毛博介绍了 Elisa

实验的一些经验教训,希望对大家有所帮助。

 

 

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