降落PCR 

(如有不明，可以咨询超博小凌)

降落 PCR（touchdown PCR），一种 PCR 技术，主要用于 PCR 的条件的优化。在许多情

况下引物的设计使得PCR难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效

率过低，但退火温度过低则会使非特异扩增过多。 

实验材料: 

基因样品 

仪器、耗材: 

PCR仪 

实验步骤： 

1.  反应体积为50 μl。 

2.  人CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系：CD137-pCDNA3质粒4 μl，P1，P2各0.5 

μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。 

3.  hIgG1Fc片段的PCR扩增体系：含人hIgG1Fc的PGEM-T质粒4 μl，P3、P4 各0.4 

μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。 

4.  HBVDNA多聚酶基因的PCR扩增体系： 

（1）Di一轮：HBVDNA模板4 μl，P5、P6各0.25 μmol/L，MgCl2 1.5 mmol/L，dNTP 

0.2 mmol/L，Taq 0.8 U. 

（2）第二轮：取5倍稀释的Di一轮PCR产物4μl为模板，P7、P8各0.25 μmol/L，MgCl2 1.5 

mmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，Taq 0.8 U。 

5.  分别在各灭菌PCR管加入上述各反应成分，100℃煮沸5 min，立即冰浴5 min，加入

TaqDNA聚合酶，混匀，离心，PCR程序如下： 

6.  取 10 μl PCR 扩增产物，在2%或3%琼脂糖凝胶上电泳，紫外灯下观察扩增产物。 

注意事项： 

由于目标是在较早的循环中避免低Tm 值配对，在TD—PCR中应用热启动技术。设计

时，退火温度的范围应跨越15℃左右，从高于估计Tm 值至少几度到低于它10℃