当前位置:首页 > 技术文章 > 降落PCR

降落PCR

发布时间:2020-03-06浏览:91次

                                                         

 降落PCR 

(如有不明,可以咨询超博小凌)

降落 PCRtouchdown PCR),一种 PCR 技术,主要用于 PCR 的条件的优化。在许多情

况下引物的设计使得PCR难以进行,例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR

率过低,但退火温度过低则会使非特异扩增过多。 

实验材料

基因样品 

仪器、耗材

PCR 

实验步骤: 

1.  反应体积为50 μl 

 

2.  CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系:CD137-pCDNA3质粒4 μlP1P20.5 

μmol/LMgCl2 2 mmol/LdNTP 0.4 mmol/LTaq 5 U 

 

3.  hIgG1Fc片段的PCR扩增体系:含人hIgG1FcPGEM-T质粒4 μlP3P4 0.4 

μmol/LMgCl2 2 mmol/LdNTP 0.4 mmol/LTaq 5 U 

 

4.  HBVDNA多聚酶基因的PCR扩增体系: 

 

1Di一轮:HBVDNA模板4 μlP5P60.25 μmol/LMgCl2 1.5 mmol/LdNTP 

0.2 mmol/LTaq 0.8 U. 

 

2)第二轮:取5倍稀释的Di一轮PCR产物4μl为模板,P7P80.25 μmol/LMgCl2 1.5 

mmol/LdNTP 0.2 mmol/LTaq 0.8 U 

 

5.  分别在各灭菌PCR管加入上述各反应成分,100煮沸5 min,立即冰浴5 min,加入

TaqDNA聚合酶,混匀,离心,PCR程序如下: 

  

 

6.  10 μl PCR 扩增产物,在2%3%琼脂糖凝胶上电泳,紫外灯下观察扩增产物。 

注意事项: 

由于目标是在较早的循环中避免低Tm 值配对,在TD—PCR中应用热启动技术。设计

时,退火温度的范围应跨越15左右,从高于估计Tm 值至少几度到低于它10

Contact Us
  • 联系QQ:277124344
  • 联系邮箱:277124344@qq.com
  • 联系电话:13760660301
  • 联系地址:广州市白云区鹤正街1号中海联8立方创意园A1栋307室

扫一扫  微信咨询

© 2020 广州市超博科技有限公司 版权所有  备案号:粤ICP备19162636号

技术支持:化工仪器网    管理登陆    GoogleSitemap

服务热线
13710660294

微信服务号