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酶免法

发布时间:2020-01-16浏览:260次

1、酶免法是什么

1971年瑞典学者和荷兰学者分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,即酶联免疫吸附测定法。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ,它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。酶联免疫吸附剂测定法,简称酶联免疫法,或者ELISA法。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。

2、酶免法的基本原理

2.1、使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

2.2、使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

3、酶免法的优缺点

3.1、优点:高度的灵敏度,由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫学反应的结果。如白介素5,用双抗体夹心ELIS法的测定限低至7.8pg/ml,较应用鼠BCL1细胞的生物检定法灵敏10000倍。较高的特异性,由于应用抗原抗体反应,故和生物检定法相比特异性较高。易于操作,快速,不使用同位素,无辐射源,适用于批处理。试剂使用寿命长。

3.2、缺点:该法测定的是待测蛋白多肽的免疫活性而非生物活性。该法不能对蛋白多肽做出阳性鉴定,如确切的生化组成和序列。易受多方面因素的干扰:一种形式的干扰来自代谢物,如果它们在原型药的免疫测定中具有交叉反应性,就能显著干扰生物利用度的测定;另一种干扰来至抗体的形成,这在临床前研究尤为突出,因为给予的人蛋白对动物明显是外源性的。这些抗体可能是中和性或非中和性的,它们可影响蛋白多肽类药物的清除和药理作用,并对其定量测定产生影响。

酶联免疫吸附法的方法类型和操作步骤

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂:固相的抗原或抗体,酶标记的抗原或抗体,酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法,操作步骤如下:将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。用脱脂奶粉或BSA进行封闭。洗涤除去多余的脱脂奶粉或BSA。加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

酶联免疫吸附测定法是什么

酶联免疫吸附测定法(elisa方法)采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在测定方法中必要的试剂有:固相的抗原或抗体(免疫吸附剂),酶标记的抗原或抗体(标记物),酶作用的底物(显色剂)

测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。方法简单方便讯速,特异性比较强。

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