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(sCD14)ELISA试剂盒.

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详细介绍

实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪白细胞介素 6(IL-6)水平。用纯化的猪白细 胞介素 6(IL-6)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入猪白细胞 介素 6(IL-6),再与 HRP 标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻 底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终 的黄色。颜色的深浅和样品中的猪白细胞介素 6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长 下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中猪白细胞介素 6(IL-6)含量。 试剂盒组成请联系公司技术小叶 样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集 上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次 离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转 /分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞 浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分 钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将 标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检 测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl (样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃 动混匀。 3. 加酶:每孔加入酶标试剂 100μl,空白孔除外。 4. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。 5. 配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。 6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。 7. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显 色 15 分钟. 8. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 9. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液 后 15 分钟以内进行。 注意事项: 1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6. 底物请避光保存。 7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9. 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释 倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值 代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。 试剂盒性能: 1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。 2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于 10%和 10% 。 检测范围: 25 pg/mL - 800 pg/mL 灵敏度: 最低检测浓度小于 1.0 pg/mL 保存条件及有效期: 1.试剂盒保存: 2-8℃。

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