人胃癌细胞

人胃癌细胞购买细胞注意事项：

1. 收到细胞后*先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，SNU-1；人胃癌细胞了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于技术部沟通交流。"    P4

    包装规格：    复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

    细胞规格：    1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

    安全水平：    1

    细胞种属：    人

    组织来源：    胃

    细胞形态：    上皮细胞样

    细胞特性：    贴壁

    细胞融合度：    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    细胞检测：    细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

    "细胞培养三不要：

养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：

1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）

其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更*，超净台内根本就不点酒精灯。

2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，SNU-1；人胃癌细胞特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。

3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞*变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。"    详见细胞说明书

    传代方法：    建议1:2-1:3 两天换液一次

    冻存条件：    详见细胞说明书

    主要文献：    请具体查阅相关发表文章

细胞接收后的操作流程与注意事项：

1、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决

2、贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（*高不能超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养

3、生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）

1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散

3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

4、SNU-1；人胃癌细胞注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）人胃癌细胞