人咽鳞癌细胞

人咽鳞癌细胞

1、您收到FaDu人咽鳞癌细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm²培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml*培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；

4）待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml*培养基重悬，接种25cm²培养瓶，于37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜*培养基继续培养。

 本公司细胞引种来源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等

人咽鳞癌细胞细胞处理方法：

一、贴壁细胞

1、 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。

4、37度平衡1-2小时。

5、用移液管吸取培养基，到50ml离心管中，剩下细胞密度达到80%至90%可以传代，如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。

6、如果肉眼检查上清有细胞，对50ml上清进行离心收集细胞，如果细胞连片状态，弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化（1ml胰酶37度），接种培养。

二、悬浮细胞

1、接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。

4、细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒）。

5、1000rpm，5min 离心，用吸管小心吸出上清，加入培养基，重悬细胞。

6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种，加入新鲜培养基，置于 37℃，5%CO2 培养（大部分细胞）。

培养操作：细胞培养操作指南

细胞常见问题分析：细胞培养常见问题分析

细胞在发货前进行质检：

1、细胞存种的活性检测

2、细菌、真菌、霉菌污染物镜检

3、衣原体、支原体检测（荧光法、培养法等）

产品质量保证及售后：

1、 细胞为三代以内，活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好，我们*免费重新发货。

2、 实验过程中若确定是客户问题，客户仅需支付物流和耗材费用，我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。

3、 产品使用过程中，可提供技术上的指导。