人膀胱癌细胞

人膀胱癌细胞使用方法：

一，烧瓶培养的处理程序

在培养瓶中接种细胞并在培养基中*填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。

1、收到后，目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。

使用倒置显微镜（配备有相位传感器），仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部？在运输过程中，培养物有时被粗略地处理，并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中（但仍然是可行的）。

2、如果细胞仍然附着，无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中，在37℃下培养细胞，直到它们准备进行传代培养BGC-823人胃腺癌细胞（低分化）没有附着，无菌地移除烧瓶的全部内容物，并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下，在37℃下孵育，直至细胞准备进行传代培养。

二、传代程序

体积为75厘米的烧瓶。增加或减少其他尺寸培养容器所需的分离培养基的量。

1、去除和丢弃培养基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液冲洗细胞层，除去所有含有胰蛋白酶抑制剂的血清痕迹。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层分散（取决于胰蛋白酶的批）。

注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。

5、在新培养容器中加入适当的细胞悬液等分试样。

6、培养37°C培养基。

推荐栽培比为1:3∶1:4。

介质更新：每周2至3次

三、人膀胱癌细胞冷冻保存程序

该协议使用量在75平方厘米的瓶；比例减少或增加的其他尺寸的分离介质的培养容器的数量。

1、去除和丢弃培养基。

2。简要冲洗细胞层0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的（通常在1到10分钟）。

注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。

5。去除胰酶EDTA溶液，将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。

6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。

7、将细胞转移至低温瓶，1ml／瓶。

8、低温容器中的细胞Frozen（NalgENα5100-01）。