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人组织细胞淋巴瘤细胞

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详细介绍
品牌自营品牌供货周期一周
应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

人组织细胞淋巴瘤细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备基础培养基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸钠 0.11g/L);优质胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) U937人组织细胞淋巴瘤细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

人组织细胞淋巴瘤细胞注意事项:

1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。

3.静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4.  悬浮细胞:将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内,1000 转/分钟离心5min,培养基上清可备用,管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养;若密度未超过80%,细胞悬液移至原瓶继续培养,待达到80%时再正常传代。备注:聚团生长慢,有密度依赖,必须使用T25培养瓶竖立培养,3天一次半量换液一次,1-2周传代一次

贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。备注:细胞贴壁慢,传代后细胞放2天不动

5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。

6.因为人组织细胞淋巴瘤细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。ZYC3695    小鼠海马趾神经元    MN-h    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 

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