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人脐静脉内皮细胞

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详细介绍

人脐静脉内皮细胞细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管,迅速放入37℃水浴中解冻至管内残留一点冰屑。用75%酒精擦拭冻存管后,将内容物吸至一15ml无菌离心管中,逐滴加入预温至37℃的RPMI-1640培液4-5ml混匀,室温1500rpm离心10分钟弃上清。再用RPMI-1640培液4-5ml洗涤一次,离心后弃上清,加HUVEC完全培养液4-5ml备用,每支HUVEC冻存管含细胞量为5×10个。

细胞接种和培养

1、细胞接种:

(1)、包被液:用去离水配制0.5%明胶溶液,过滤除菌。

(2)、培养瓶包被:取2-4个T25培养瓶,每个培养瓶加2-3ml0.5%明胶溶液,摇匀使包被液布满培养瓶底面,置37℃2小时或放置过夜。

(3)、接种细胞:接种前吸净包被液,按2500-5000个细胞/cm接种细胞(1支5×10个细胞可接种2-4个培养瓶),每瓶加培养液3-5ml,摇匀后置37℃5%CO2培养箱内培养24小时,此时细胞已完全贴壁,更换培养液后继续在37℃5%CO2培养箱内培养。

(4)、扩大培养:一般每周更换培养液2次,至细胞长至覆盖培养面的70-80%可进行传代或冻存。

消化细胞

消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank'S液,分别配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液,用前按1:1混合。在细胞传代或冻存前先消化细胞。具体操作如下:吸净培养液,每瓶加消化液1ml,摇匀使其布满培养瓶细胞面。37℃消化2-5分钟。显微镜下看细胞回缩成圆形后,轻轻震动使绝大部细胞脱落后,每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用,并用吸管轻轻吹打培养面使细胞完全脱落后,吸至15ml无菌离心管内。4℃1500rpm离心10分钟弃上清,再用中和液洗涤细胞,离心弃上清,加适量RPMI-1640液,混匀后取10ul 细胞悬液加10ul台盼蓝混匀后作细胞计数,按需要做步骤四或五。

细胞传代

方法同步骤二。

人脐静脉内皮细胞细胞冻存

调整细胞数2-5×10个/ml,按含细胞的RPMI-1640液ml数,配制等量的冻存液。冻存液中FBS占80%,DMSO占20%。例:含细胞的RPMI-1640液为8ml,应配冻存液8ml,其中FBS为6.4ml,DMSO为1.6ml,混匀。置细胞悬液于冰浴中,逐滴加入冻存液,边加边摇动。加完后用吸管吹打混匀。于冰浴中分装细胞于冻存管中,1.8ml/管,再将冻存管置于冻存盒内置-80℃冰箱,24小时后转入液氮中保存。

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