人乳腺癌细胞DDP耐药株

人乳腺癌细胞DDP耐药株

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%，需要对其进行传代，传代比例为1:2到1:3；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于室温预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于室温孵育消化（*次消化需置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间，记录zui佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后收集细胞悬液，1000rpm离心3min，弃上清，加入*培养基重悬细胞，进行传代。（具体根据随货说明书进行操作）

人乳腺癌细胞DDP耐药株

冻存条件：*培养基+FBS+DMSO(备注：建议使用本公司的培养条件，用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)