小鼠骨肉瘤成骨细胞

　小鼠骨肉瘤成骨细胞

一、客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；
　　收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
　　二、如为贴壁细胞，请在显微镜下观察细胞密度：
　　1.  未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水，喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ml左右，放在离心管里，然后瓶口过火（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ml的移液管，将剩余的培液全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整）之后，传代或者冻存。
　　2. 超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下：
　　1) 弃去培养液，用3ml PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次；
　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA）于T25培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来；
　　3) 加入6-8ml*培养基，吸出，分到新的培养瓶中，按要求分瓶。
　　三、如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
　　注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。
　　四、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
　　（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
　　（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
　　（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
　　（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
　　（5）视具体情况而定。
　　五、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
　　（1）客户造成细胞污染，不重发；
　　（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
　　（3）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
　　（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；
　　（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；
　　（6）视具体情况而定。　

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