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小鼠骨肉瘤成骨细胞

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详细介绍

 小鼠骨肉瘤成骨细胞

一、客户收到细胞先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;
  收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
  二、如为贴壁细胞,请在显微镜下观察细胞密度:
  1.  未超过80%汇合度时,用75%酒精(建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水,喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作;然后打开盖子,先用枪头把培养基吸出10ml左右,放在离心管里,然后瓶口过火(严禁直接倾倒),这样可以保证不污染,再用10ml的移液管,将剩余的培液全部吸出,放于离心管中,培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整)之后,传代或者冻存。
  2. 超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下:
  1) 弃去培养液,用3ml PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次;
  2) 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA)于T25培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来;
  3) 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中,按要求分瓶。
  三、如为悬浮细胞,吸出培养液,1000转/分钟离心5分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
  注意:换液时一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造成生长不好。
  四、细胞出现问题,可重发的情况有哪些?判定标准是什么?
  (1)细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、破损、漏液等,重发;
  (2)冻存的细胞复苏后,绝大多数细胞未存活,重发;
  (3)存活的细胞静置24小时后,绝大多数细胞未存活,重发;
  (4)冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封,出现污染,重发;
  (5)视具体情况而定。
  五、细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?
  (1)客户造成细胞污染,不重发;
  (2)客户不正确操作致细胞状态不好,不重发;
  (3)细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发;
  (4)细胞培养时经其它处理的,不重发;
  (5)细胞收到2天内,未告知,不重发;
  (6)视具体情况而定。 

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