小鼠心肌细胞

1、培养液：1：1 混合的DMEM / F12 培养液，添加终浓度为10%小牛血清（FCS）、100IU/ml 青霉素、100μg/ml 链霉素。

2、消化液：胰酶（效价为1：250） 0.08%、胶原酶II（活力为150U/mg） 0.05% ，用pH 7.2-7.8 的D-Hanks溶液配制，-20 ℃保存。

3、D-Hanks溶液（pH 7.2-7.8）：KCl 0.4 g 、KH2PO4 0.06 g 、NaCl 8.00g 、NaHCO3 0.35 g 、Na 2HPO4•7H2O 0.09 g 、酚红 0.01 g 1L。

小鼠心肌细胞取生后1-4d的乳鼠，用75%乙醇消毒皮肤，再用大头针固定乳鼠的头及四肢，剪开胸部皮肤，用75%乙醇消毒皮下组织，更换镊子及剪刀，开胸取出心脏，将心脏放入盛有D-Hanks溶液的平皿（或青霉素瓶）中，剪去心房，剪开心室，用D-Hanks溶液冲洗三次，去除残留积血后，将心脏剪成1mm3 大小的碎片，再将心脏碎片转移至离心管中，加5ml左右消化液，37℃消化5 min，自然沉淀，弃上清，再加5ml左右消化液，37℃消化20min（每隔2min振摇几下），用吸管吹打1min 后，将未消化*的心脏碎片吸出至另一离心管中，加入2ml冷的培养液终止消化，1000 rpm 5min ，弃上清，沉淀中加入D-Hanks溶液2ml， 1500 rpm 10min ，弃上清，沉淀中加入培养液2ml，用吸管吹打制成细胞悬液。上述未消化*的心脏碎片补加5ml左右消化液后继续消化，同样操作，合并细胞悬液后放入培养瓶中m二氧化碳培养箱中（37℃ 5%CO2）培养。小鼠心肌细胞