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小鼠心肌细胞

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详细介绍

1、培养液:1:1 混合的DMEM / F12 培养液,添加终浓度为10%小牛血清(FCS)、100IU/ml 青霉素、100μg/ml 链霉素。

 

2、消化液:胰酶(效价为1:250) 0.08%、胶原酶II(活力为150U/mg) 0.05% ,用pH 7.2-7.8 的D-Hanks溶液配制,-20 ℃保存。

 

3、D-Hanks溶液(pH 7.2-7.8):KCl 0.4 g 、KH2PO4 0.06 g 、NaCl 8.00g 、NaHCO3 0.35 g 、Na 2HPO4•7H2O 0.09 g 、酚红 0.01 g 1L。

小鼠心肌细胞取生后1-4d的乳鼠,用75%乙醇消毒皮肤,再用大头针固定乳鼠的头及四肢,剪开胸部皮肤,用75%乙醇消毒皮下组织,更换镊子及剪刀,开胸取出心脏,将心脏放入盛有D-Hanks溶液的平皿(或青霉素瓶)中,剪去心房,剪开心室,用D-Hanks溶液冲洗三次,去除残留积血后,将心脏剪成1mm3 大小的碎片,再将心脏碎片转移至离心管中,加5ml左右消化液,37℃消化5 min,自然沉淀,弃上清,再加5ml左右消化液,37℃消化20min(每隔2min振摇几下),用吸管吹打1min 后,将未消化完全的心脏碎片吸出至另一离心管中,加入2ml冷的培养液终止消化,1000 rpm 5min ,弃上清,沉淀中加入D-Hanks溶液2ml, 1500 rpm 10min ,弃上清,沉淀中加入培养液2ml,用吸管吹打制成细胞悬液。上述未消化完全的心脏碎片补加5ml左右消化液后继续消化,同样操作,合并细胞悬液后放入培养瓶中m二氧化碳培养箱中(37℃ 5%CO2)培养。小鼠心肌细胞

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