羊骨髓间充质干细胞

对羊骨髓间充质干细胞加以诱导分化,并分析其作为组织工程瓣膜种子细胞的可行性,探讨体外培养羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)和一般细胞生物学的特性。方法:采用成年山羊10只,麻醉后分别于股骨大转子穿刺抽取羊骨髓标本10ml,采用比重为1.07g/ml的淋巴分离液,接种于无菌的培养瓶中,利用多孔培养板,取第二、三代骨髓间充质干细胞,加入LG-DMEM条件培养基进行体外定向诱导分化。对诱导后培养的骨髓基质的间充质干细胞(MSCs)进行细胞生长测定及形态观察。结果:培养后的骨髓间充质干细胞和血管间质细胞形态相似,呈梭形或多角型,均24小时内贴壁,3～4天铺满瓶底。诱导分化后的骨髓间充质干细胞与血管间质细胞上清液羟脯氨酸含量基本相似,且生长曲线也相同。培养的MSCs粘附贴壁呈纺锤状,并有多个突起,潜伏期一般为24小时,接种后第8天MSCs生长逐渐缓慢,进入平台期。结论:诱导分化后所培养的间充质干细胞,具有*的增殖和表型特征,是合适的组织工程瓣膜间质种子细胞。

用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；