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人胃腺癌细胞(低分化)

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详细介绍

BGC-823人胃腺癌细胞(低分化)

当密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时,可以冻存细胞,在超净台中将要冻存的细胞移入离心管,1000rpm离心5min,弃上清,用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞,并调整细胞密度为4-6×106/ml,将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。

含量:>1x106 个/mL,  规格:T75瓶或者1mL冻存管包装

培养基:RPMI-1640(GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L),90%;胎牛血清,10%。 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度。

生长特性:贴壁生长

污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

人胃腺癌细胞(低分化)

传代操作步骤:

一、贴壁细胞传代

1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。

2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞。

3.加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用。

4.用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡。

5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞传代

1.将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min。

2.弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液。

3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。

培养的过程中,经常见到黑色的颗粒或小黑点,这种情况是怎么引起的呢?该怎么避免呢?原因:

黑点,大概有细胞本身带的,环境有的,还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基

1、如果小黑点有增殖趋势,那么就有可能是污染了,需要处理;

2、如果小黑点没有增殖趋势,且不影响细胞生长,也不影响实验的话,则可能

 a、是“黑胶虫”,黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫,也有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。以前(这个至少是10年以前),很多实验室在养细胞时用国产血清,那时的血清可能质量不过关,有所谓的“黑胶虫”,但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清,即使国产的,产品里这种现象就少见了。

 b、是细胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗运动。

 c、是核糖体,也可能是杂质ZYC3194    人宫颈癌肠转移细胞    Ca Ski    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3195    人子宫鳞癌细胞(高分化)    HCC 94 [HCC941122]    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3196    人子宫内膜腺癌细胞    HEC-1-B    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3197    人卵巢癌细胞    SK-OV-3    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3198    人卵巢透明细胞癌    ES-2    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3199    人乳腺癌细胞    HCC1937    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3200    人胎盘绒毛癌细胞    JAR    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3201    人羊膜细胞    WISH    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3202    人整合SV40基因的乳腺上皮细胞    HBL-100    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3203    人乳腺癌细胞    Hs 578T    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3204    人乳腺癌细胞    MCF7 [MCF-7]    形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样    培养条件:MEM/F12 +10% FBS 

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