Hyclonesv30087.02北美特级血清*

Hyclonesv30087.02北美特级血清*​

适合用于常规细胞原代细胞以及干细胞的培养
内毒素含量极低 <3EU/ml(规定：特级胎牛血清<10 EU/ml)
极利于细胞的生长和传代 ，适合各种细胞培养
七次无菌过滤，zui后三次为0.1 µm无菌过滤处理
进行细菌、真菌、支原体、病毒及病毒抗体检测，符合动物协会要求

Hyclonesv30087.02北美特级血清*​

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的

胎牛血清FBS保存方法
1、需要长期保存的PAN牛血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在 37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血 清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可 将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前，必须预留 一 定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接 过滤血清。

3、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全 部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程 中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度 与成分均一,减少沈淀的发生。.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而 出现沉淀。

4、热灭活是指56℃, 30分钟加热已*解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体 成分灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉 淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体 参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞 发生化学趋化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身 的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下 "小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物 的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑 点不会影响细胞生 长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。

胎牛血清使用中遇到的常见问题总结
 

一、血清灭活问题。

1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？

答：不是必须的，看做什么实验了。

2、问：胎牛血清灭活是56℃ 30分钟吗？

答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。 但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是 需要灭活，一般是56℃，30min。

3、问：我要做滋养细胞培养，胎牛血清要灭活吗？

答：进口的一般都已灭活，国产的不一定，还是灭活一下再用较安全。

4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活吗？因为血清中可能有些补体和抗体，是不是会影 响转染？我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合，影响 转染，正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞， 病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时，目的是什么？

答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主 结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需 要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活 ！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。

5、问：(1)我买的是PAN南美胎牛血清，要灭活吗？有些说法是需要，有些说直接解冻后就可以加入到培 养基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有关系吗？

答：关于血清的热灭活，是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为 常规来执行，因为有两个作用，是灭活补体，第二是灭活血清中可 能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处 理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。

我在实验室处理血清的时候，有一次水浴箱在灭活过程中出现故障，温度升高到80℃，血清变成了凝胶状 ，我重新处理了另外一份血清，将两份血清对比，发现高温直接影响到 血清所含的抗体蛋白。在56℃下灭活半小时以 上，肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试，看看到底有多大的影响。热 灭活之后，血清放在四 度冰箱久了，就会有沉淀产生，这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到 底有没有污染，常常又会把血清放置37℃温育，但是血清中的蛋白会进一步析出，后还是 要做镜检，无菌培养试验 ，和革兰氏染色试验，非常麻烦。