细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基灭菌的方式分为高压灭菌和膜过滤除菌,不同的培养基由于其营养成份不同,灭菌方式也可能不同。
细胞培养基的灭菌方式如下:
1、高压灭菌
某些培养基(如MEM)可进行高压灭菌,这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,一般是在培养基高压灭菌后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi,15分钟的条件下可达到灭菌效果及营养成分的最小损失,不需将灭菌时间延长。
绝大多数细胞培养基不适宜高压灭菌。因培养液中常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。可供过滤灭菌使用的滤膜很多,其材料多为polyethersulphone(PES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。
2、膜过滤除菌是当前较为常用及便捷的一种方法,常采用0.2μm孔径的滤膜,部份采用0.1μm孔径。与高压过滤方式相比,滤膜具有使用期限且价格较高,但对细胞培养基的营养成份破坏性较小。