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动物实验做得好,只因做了这些...

发布时间:2020-03-25浏览:241次

要想发表高分 SCI 文章,往往需要和动物实验打交道。为了获得理想中的动物实验结果,对

科研汪而言,具有扎实的相关基础知识就是必不可少的。现在小鱼就从实验动物的饲养条件、

给药剂量及方式和分组及编号三个方面对动物实验的基础知识进行盘点。

实验动物的饲养环境

做动物实验,zui先要做的事情就是要养好动物。因而,好的动物饲养环境,对于动物实验的

成功也是zui基本的保证然而万事开头难,这也是个看似平常,但却有着不少细节的问题。

1般情况下,小鼠是大多数实验室采用的实验动物模型。由于小鼠对环境适应性的自体调节

能力和疾病抗御能力较其他实验动物差,且小鼠的品种和品系繁多,各个品种和品系都有自

己的特殊要求,即不同等级的小鼠应生活在相应的设施中,因此必须根据实际情况给予1个

清洁舒适的生活环境。

现阶段很多高校1般都会有专门的动物房及专业的饲养员进行培养,所以可能更多时候,小

伙伴们所纠结的是对于实验动物,每笼该饲养多少才算合适呢?毕竟,每种动物都有1个合

适生存的zui小平均空间,低于这个空间则会出现1些相互打架、易致病等1系列不良现象。

在此小鱼建议大家,针对小鼠笼/大鼠笼,每笼饲养 5 左右为宜,zui多不超过 7 只。豚鼠通

常被置于兔笼或大鼠笼中,1般以 3-4 只为宜。兔、猫、狗等,1般都是每笼只养1只,且

有专门的笼具。

在实验小鼠中,转基因老鼠可以说是特别娇贵的存在,其饲养的条件及要求均要高于普通小

鼠。SPF 级环境是饲养转基因小鼠的必备环境,其中,高压灭菌过的垫料和 M5 型的小鼠饲

养笼是其标准配备,不仅饲料要采用 60Coγ 射线灭菌的无菌全价营养颗粒料,且饮用水也是高压灭菌后的纯净水(每周换水 2-3 次)。饲养室内每天也需经紫外灯照射两小时杀菌。

另外,需要密切观察转基因小鼠的饮食、活动及全身情况。如果小鼠食欲旺盛;眼睛有神,

反应敏捷;体毛光滑、活动有力;粪便黑色呈麦粒状,则说明转基因小鼠处于健康状态,可

用于后续其他的生物实验。

给药剂量的换算

动物实验中,zui常涉及的就是给药剂量的估算,想来大多数同学都是通过查文献、参考别人

使用的药物剂量来设计自己的实验,但是如果是1种新型研发药物时,又该如何确定实验动

物的给药剂量呢?

此时可参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》中1个关于人和动物间按体表面积折算的

等效剂量比值的表格来计算使用药品的剂量。(该表格几乎被药理专业的人们奉为经典,1

直在科研中沿用)

1190上述表格中的zui1行,便是剂量换算中的折算系数(已经把体重与体表面积的关系折算过

了),依据公式可将人的临床剂量转换为实验动物的剂量。

举个栗子,如人的临床剂量为 X mg/kg,换算成大鼠的剂量 Y= X mg/kg × 70kg ×

0.0018/0.2kg=6.3 X mg/kg。即按单位体重的剂量来算,大鼠的等效剂量相当于人的 6.3 倍。

依次类推,可以算出小鼠、豚鼠等其他动物剂量与人的比值。

Tips1)人的临床剂量通常会以 mg/d 来表示,此时,需要将其转化成 mg/kg 来代入公式中。

2)这种换算关系的前提是各种动物对某种药物的敏感程度是1样的。因而,在实际的动物

实验中,药物剂量的确定1半可参考等效剂量,1半需要设置药物浓度梯度来摸索zui佳给药

剂量。3)以上表格中,人的体重设为 70kg,但是实际上人的体重更接近于 60kg 左右。如此

修正后表格如下图所示。

1191同样,给药途径也对药物的作用产生1定的影响给药途径1般常见的有腹腔注射,皮下注

射等方式。

前者在给小鼠注射时,将针头约以 10°角从下腹部刺入皮下,然后再以 45°角刺入腹腔,注入

药液,穿刺部位不宜太高,否则药液会注入到胸腔;后者在给小鼠注射时,则将注射器针头

10°角刺入前肢腋部或颈背部皮下。注射后,皮下可见1隆起小包,然后将针头稍向后退

出1段再顺时针转动针尖拨出,以防漏药。

不同给药途径剂量的换算如下图所示。

1192实验动物的分组及编号

实验小鼠常需要标记以示区别,编号的方法很多,应根据小鼠的品系、数量和观察时间长短

等因素来选择合适的标记方法。

其中,化学药品涂染小鼠被毛法是实验zui容易掌握且zui常用的方法。常用的涂染化学药品有

三种:1)涂染红色:0.5%中性红或碱性品红溶液。2)涂染黄色:3-5%苦wei酸溶液。3)涂

染黑色:煤焦油的酒精溶液。实验中应根据小鼠的品系选择染料的颜色。

1般用1种化学药品涂染实验动物背部被毛即可,如果实验动物数量较多,可选择两种染料。

但是该法对实验周期短的实验动物合适,因为时间长了染料的颜色易退掉。这对辛辛苦苦做

实验,期待有个好结果的童鞋而言,可是个灾难性的打击。

下面小鱼简单介绍下用染料给小鼠编号的原则:先左后右,从前到后#1:涂染到左前肢;

#2:左侧腹部;#3:左后肢;#4:头顶部;#5:腰部;#6:尾部;#7:右前肢;#8:左腹部;

#9:右后肢。且联合使用不同颜色可将编号编至 99 号。

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也许有的小伙伴们仍会担心即便用新染料给小鼠编号,短期内染料掉色的可能也不是没有的,

有木有1劳永逸的标记小鼠的方法么?在此,小鱼再给大家推荐两个可让小鼠终身标号方法。

1)打耳孔法或剪缺口法。

前者即利用打孔机在鼠耳1定位置打1小孔来表示1定的号码,后者用剪子在耳缘剪缺口,

剪完后还应用滑石粉捻1下,以免愈合后看不出来。总的来说,1般习惯在耳缘内侧打小孔,

按前、中、后分别代表 123 号,在耳缘部打成1个缺口,分别表示 456 号,打成双

缺口则表示 789 号。右耳表示各位,左耳表示十位,再加右耳中部打孔表示百位。该法

可以编至 1400 号。2)剪趾法,即将小鼠左右前肢的脚趾按不同排列代表不同的数字,1般习惯从左向右第1

趾为#1,第二趾为#2,前1、二趾同时剪去为#3,第三趾为#4,前三趾同时剪去为#5,第1、

三趾同时剪去为#6,第四趾剪去为#7,第1、四趾同时剪去为#8,第二、四趾同时剪去为#9

右前肢表示个位,左前肢表示十位,按此法四肢可标号至 4999 号。

 

 

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