将收集的各样品加入等体积的 2×SDS-PAGE Loading Buffer，煮沸裂解 5min，冰浴

2min，12,000rpm 离心 10min，取上清-20℃保存备用。

SDS-PAGE 蛋白质电泳（参照分子克隆实验指南操作）(萨姆布鲁克,2002)

1）按照电泳装置的使用说明，装好洁净干燥的玻璃板。

2）分离胶的制备

按下列成分配制10mL 12%分离胶：

ddH2O

30%丙烯酰胺混合液

1.5M Tris(pH8.8)

10%SDS

10%过硫酸铵

TEMED

3.3 mL

4.0 mL

2.5 mL

0.1 mL

0.1 mL

0.004 mL

总体积

10 mL

各成分加入后迅速旋涡混匀，用微量移液器将其小心地注入准备好的玻璃板间隙中，

并为积层胶留出足够空间。轻轻在顶层加入一薄层水封顶，以防止空气中的氧对凝胶聚合的

抑制作用。凝胶聚合完成后，倒掉覆盖的水层，用水清洗凝胶顶部数次，用滤纸吸干凝胶顶

端的水。

3）积层胶的制备

按下列成分配制2mL 5%的积层胶：

ddH2O

30%丙烯酰胺混合液

1.4mL

0.33mL1.0M Tris(pH6.8)

10%SDS

10%过硫酸铵

TEMED

0.25mL

0.02mL

0.02mL

0.002mL

总体积

2mL

各成分加入后迅速旋涡混匀，用微量移液器将其灌注到分离胶上，灌满后小心插入加样

梳，尽可能避免产生气泡。

4）待积层胶凝固后，小心拔下梳子。

5）将凝胶固定于电泳装置上，加入足量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液，在加样孔中分

别加入20μL各样品。

6）样品在积层胶中电泳时，使用80V电压，待溴酚蓝带进入分离胶后，将电压升至

120V，继续电泳直至溴酚蓝带到达分离胶的底部且开始泳出胶底面，关闭电源。

7）卸下凝胶，将其浸泡在至少5倍体积的考马斯亮蓝R-250染色液中，置水平摇床上

室温染色至少4h，之后取出染色的凝胶并回收染液，以备再用，将凝胶浸泡于考马斯亮蓝

脱色液中，在水平摇床上脱色4~8h，其间更换脱色液3~4次，直至凝胶脱色到条带清晰为

止，观察记录结果并拍照。