转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转

染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生

物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；

化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的

技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染

技术。

理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目

前转染效率zui高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复

杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转

染方法，则各有其特点。

需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得*的转染结果，可能都需要对转染条件

进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染

方法的操作细节，都需要考虑。

一、细胞传代

1. 试验准备：200ul/1mlTip 头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管

架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。

2. 弃掉培养皿中的培养基，用 1ml 的 PBS 溶液洗涤两次。

3. 用 Tip 头加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分钟(37℃，5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁，观察

到细胞*从壁上脱落下来为止。

4. 加入 1ml 的含血清培养基终止反应。

5. 用 Tip 头多次吹吸，使细胞*分散开。6. 将培养液装入离心管中，1000rpm 离心 5min。

7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择 0.8X106 个细胞加入一个 35mm 培养皿。

8. 将合适体积*培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

9. 将培养皿转入 CO2培养箱中培养，第二天转染。

二、细胞转染

1. 转染试剂的准备

① 将 400ul 去核酸酶水加入管中，震荡 10 秒钟，溶解脂状物。

② 震荡后将试剂放在－20 摄氏度保存，使用前还需震荡。

2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA 质量)来转染细胞。在一个转染管

中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震荡后在加

入合适体积的转染试剂，再次震荡。

3. 将混合液在室温放置 10―15 分钟。

4. 吸去培养板中的培养基，用 PBS 或者无血清培养基清洗一次。

5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6. 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入*培养基继续培养 24－48 小

时。

三、第二次细胞传代

1. 在转染后 24 小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。

2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度 0.8X105个细胞/35mm 培养皿将细胞重

新转入培养皿中。

3. 在正常条件下培养 24 小时后按照染色要求条件固定。转染方法 原理

主要应用 特点

DEAE－

葡聚糖法

带正电的 DEAE-葡聚糖与核

酸带负电的磷酸骨架相互作用

形成的复合物被细胞内吞

瞬时转染

相对简便、重复比磷酸钙好，但对

细胞有一定的毒副作用，转染时需除

血清且一般只用于 BSC-1，CV-1，

COS 细胞系

磷酸钙法

磷酸钙 DNA 复合物吸附细胞

膜被细胞内吞

稳定转染，

染瞬转染

不适用于原代细胞（所需的 DNA 浓

度较高），操作简便但重复性差，有

些细胞不适用

细胞建议用 CSCL 梯度离心，转染是

拷贝数较多

阳离子脂

质体法

带正电的脂质体与核酸带负

电的磷酸基团形成复合物，然

后脂质体上剩余的电核与细胞

膜上的唾液酸残基的负电核结

合；另一种解释是通过细胞是

内吞作用而被进入细胞。(若

DNA 浓度过高，中和脂质体表

面电核，而降低了与细胞的结

合能力)

稳定转染，

瞬时转染，

所有细胞

使用方法简单，可携带大片段

DNA，通用于各种类型的裸露 DNA

或 RNA，能转染各种类型的细胞，

没有免疫原性。虽在体外基因转染中

有很高的效率，但在体内，能被血清

清除，并在肺组织内累积，诱发强烈

的抗炎反应，导致高水平的毒性，这

在很大程度上限制了其应用

阳离子聚

合物

带正电的聚合物与核酸带负

电的磷酸基团形成带正电的复

稳定转染，

瞬时转染，

除了具有阳离子脂质体的转染效

率高，操作简单，适用范围广，重复合物后与细胞表面带负电的蛋

白多糖相互作用，并通过内吞

作用进入细胞。

所有细胞 性好等特点外，还具有在体内，转染

效率高，细胞毒性低等特点，是新一

代的转染试剂。

病

毒

介

导

法

逆转

录病

毒

(RNA)

通过病毒中膜糖蛋白和宿主

细胞表面的受体相互作用而进

入宿主细胞，之后反转入酶启

动合成 DNA 并随机整合到宿

主基因组中

稳定转染，

特定宿主

细胞

可用于难转染的细胞、原代细胞，

体内细胞等，但携带基因不能太大

（<8kb），细胞需处分裂期，需考

虑安全因素

腺病

毒(双

链

DNA)

先和细胞表面的受体结合，继

而在 αv 整合素介导下被细胞

内吞

瞬时转染，

特定宿主

细胞

可用于难转染的细胞，需考虑安全

因素

Biolistic

颗粒传递

法 （基因

枪粒子轰

击法）

将 DNA 用显微重金属颗粒沉

淀，再将包被好的颗粒用弹道

装置投射入细胞，DNA 在胞内

逐步释放，表达

瞬时性转

染，稳定转

染

可用于：人的表皮细胞，纤维原细

胞，淋巴细胞系以及原代细胞

显微注射

法

用显微操作将 DNA 直接注入

靶细胞核

稳定转染，

瞬时转染

转染细胞数有限，多用于工程改造

或转基因动物的胚胎细胞

电穿孔法

高脉冲电压破坏细胞膜电位，

DNA 通过膜上形成的小孔导

稳定转染，

瞬时转染，

适用性广，除了质粒外，还可转染

大的基因组（>65kb）但细胞致死率入

所有细胞 高，DNA 和细胞用量大， 需根据

不同细胞类型优化电穿孔实验条件，

拷贝数较少 1-20