qPCR荧光定量的基本原理就是在PCR扩增过程中,随着PCR循环数的递增,PCR产物不断积累,荧光信号也会相应的增加,这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测,实现基因的相对定量、定量和定性分析。
qPCR荧光定量的生产工艺:
产品品质与生产工艺密不可分,先进的制造工艺和高精度设备是产品品质的前提,PCR实验特别注重PCR材料的管壁厚度,需要超薄且管壁厚度均匀性非常一致,以保证加热模块的热量均匀地传导给PCR管内样品,实现实验结果的准确性。
透光性
由于大多数荧光定量qPCR仪器的特性,光路需要从耗材的顶部传导到管内参与反应,所以耗材的透光性需要特别的高。
密封性
管盖跟管体的密封性能需要特别地好,以防止管内样品的蒸发,避免交叉污染,保证实验结果的正确无误!
生产环境
有了精密的设备,洁净的生产车间也非常重要,如果因为耗材不洁净造成样品的污染,实验结果将非常不准确,排查原因耗时费力,严格的生产质控可以确保各批次产品性能的稳定想,保证实验数据的精确性和可重复性。
qPCR荧光定量具有以下技术优势:
1.实时监测:通过扩增曲线能够实时监测PCR产物的积累。
2.特异性强:实验完成后,溶解曲线的分析可以验证扩增产物的特异性,降低假阳性。
3.精确定量:利用扩增进入指数增长期的CT值来定量测定起始模板量,从而实现了极为精确的核酸定量检测。