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细胞冻存液的操作步骤和注意事项

发布时间:2019-12-04浏览:125次

   细胞冻存和复苏操作步骤:

  细胞冻存和复苏采取“慢冻快融”的原则,慢速冷冻可使细胞内的水份渗出细胞外,减少细胞内形成冰晶的机会,快融以保证细胞外结晶快速融化,避免慢速融化水份渗入细胞内,再次形成胞内冰晶造成对细胞的损伤。
  (一)细胞冻存
  1.配制含的细胞冻存液,预冷(新鲜配制的冻存液会产生大量的热);
  2.取对数生长期的细胞,用细胞消化酶将单层生长的细胞消化下来;悬浮细胞则直接将细胞收集到离心管中;
  3.离心;
  4.去除上清液,逐渐加入适量预冷的细胞冻存液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中的细胞终浓度;
  5.将细胞分装入冻存管中,每管;
  6.在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间及操作人员姓名;
  7.冻存:标准的冻存程序为降温速率,则可迅速放入液氮中。
  (二)细胞复苏
  1.佩戴眼镜和手套,从液氮中取出冻存的细胞管。
  2.迅速放入水浴中,并不时摇动,在1分钟内使其完全融化,然后在无菌条件下取出细胞。
  3.弃去上清,加入适量培养液混匀后接种于培养瓶中,次日更换一次培养液。
  细胞冻存液的注意事项:
  1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液;
  2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;
  3.冻存和复苏好用新配制的培养液。

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