细胞冻存和复苏采取“慢冻快融”的原则，慢速冷冻可使细胞内的水份渗出细胞外，减少细胞内形成冰晶的机会，快融以保证细胞外结晶快速融化，避免慢速融化水份渗入细胞内，再次形成胞内冰晶造成对细胞的损伤。

　　（一）细胞冻存

　　1.配制含的细胞冻存液，预冷（新鲜配制的冻存液会产生大量的热）；

　　2.取对数生长期的细胞，用细胞消化酶将单层生长的细胞消化下来；悬浮细胞则直接将细胞收集到离心管中；

　　3.离心；

　　4.去除上清液，逐渐加入适量预冷的细胞冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中的细胞终浓度；

　　5.将细胞分装入冻存管中，每管；

　　6.在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间及操作人员姓名；

　　7.冻存：标准的冻存程序为降温速率，则可迅速放入液氮中。

　　（二）细胞复苏

　　1.佩戴眼镜和手套，从液氮中取出冻存的细胞管。

　　2.迅速放入水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其*融化，然后在无菌条件下取出细胞。

　　3.弃去上清，加入适量培养液混匀后接种于培养瓶中，次日更换一次培养液。

　　细胞冻存液的注意事项：

　　1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液；

　　2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；

　　3.冻存和复苏好用新配制的培养液。