细胞冻存步骤： 

细胞复苏步骤： 

常见注意事项： （广州市超博科技有限公司）

有关 DMSO 的一些注意事项：

 

DMSO 能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内的离子 浓度、减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤程度。 

DMSO 在溶解过程中会放热，应先与培养基混匀后再加血清，同时冻存液需要提前配置， DMSO 现配对细胞的毒性可能更大； 

复苏时，要离心去除 DMSO，并用新鲜的培养基洗涤 1-2 次，注意离心的时候速度不要太快； 

2.  血清需要比正常养细胞时多加，一般为 10%-20%。 

3.  解冻时，要尽快将冻存管整体温度上升至 37 摄氏度，由于冻存管具有一定的厚度，故 而可以将水浴锅的温度调至 40 摄氏度左右，可以缩短解冻时间。 

4.  梯度冻存，即可以按照-4℃-->20℃~40℃-->80℃-->液氮的顺序程序性降温。 

知识点思维扩散： 

  1972 年，冷冻损伤的两因素假说：冰晶损伤和溶液损伤假说被 Mazur 等人首先提出，

他们是根据中国仓鼠组织培养细胞的低温保存实验数据分析得到的。 

 冰晶损伤假说认为随着温度的下降，细胞内外的水分结冰，所形成的冰晶会造成细胞膜

和细胞器的破坏并引起细胞死亡。这种因细胞内部结冰而致的细胞损伤即就是冰晶损伤

(Intracellular ice damage)。冰晶损伤是由冷却速度过快造成，冷却速度越快，冰晶损伤越大。 

 溶液损伤解说认为随着温度的下降，细胞外部的水分会先结冰，从而使得未结冰的溶液

中电解质浓度升高，细胞膜上的脂质会因长时问暴露在高溶质的溶液中而受到损坏，细胞发

生渗漏，导致在复温时大量水分渗入细胞内造成细胞死亡。这种因保存溶液溶质浓度增高而

致的细胞损伤被称为溶液损伤(Solution damage)。溶液损伤是由冷却速度过慢，使细胞在高

浓度的溶液中暴露的时间过长而造成，冷却速度越慢，此损伤越严重。 

  作者：老谈