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细胞冻存与复苏的前世今生

发布时间:2019-10-08浏览:268次

细胞冻存步骤: 

细胞复苏步骤: 

常见注意事项: (广州市超博科技有限公司)

有关 DMSO 的一些注意事项:

 

DMSO 能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞内的离子 浓度、减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤程度。 

DMSO 在溶解过程中会放热,应先与培养基混匀后再加血清,同时冻存液需要提前配置, DMSO 现配对细胞的毒性可能更大; 

复苏时,要离心去除 DMSO,并用新鲜的培养基洗涤 1-2 次,注意离心的时候速度不要太快; 

 

2.  血清需要比正常养细胞时多加,一般为 10%-20%。 

3.  解冻时,要尽快将冻存管整体温度上升至 37 摄氏度,由于冻存管具有一定的厚度,故 而可以将水浴锅的温度调至 40 摄氏度左右,可以缩短解冻时间。 

4.  梯度冻存,即可以按照-4℃-->20℃~40℃-->80℃-->液氮的顺序程序性降温。 

 

知识点思维扩散: 

  1972 年,冷冻损伤的两因素假说:冰晶损伤和溶液损伤假说被 Mazur 等人首先提出,

他们是根据中国仓鼠组织培养细胞的低温保存实验数据分析得到的。 

 冰晶损伤假说认为随着温度的下降,细胞内外的水分结冰,所形成的冰晶会造成细胞膜

和细胞器的破坏并引起细胞死亡。这种因细胞内部结冰而致的细胞损伤即就是冰晶损伤

(Intracellular ice damage)。冰晶损伤是由冷却速度过快造成,冷却速度越快,冰晶损伤越大。 

 溶液损伤解说认为随着温度的下降,细胞外部的水分会先结冰,从而使得未结冰的溶液

中电解质浓度升高,细胞膜上的脂质会因长时问暴露在高溶质的溶液中而受到损坏,细胞发

生渗漏,导致在复温时大量水分渗入细胞内造成细胞死亡。这种因保存溶液溶质浓度增高而

致的细胞损伤被称为溶液损伤(Solution damage)。溶液损伤是由冷却速度过慢,使细胞在高

浓度的溶液中暴露的时间过长而造成,冷却速度越慢,此损伤越严重。 

  作者:老谈 

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