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实时荧光定量PCR具体实验步骤1样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯fang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯fang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中...
近年来，ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用。ELISA可用于测定抗原，也可以用于测定抗体。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可以分为双抗夹心法、间接法、竞争法等常见几种类型。那么，这几种常见类型分别适用于哪些实验？这些类型的优缺点又是什么呢？今天小编就和大家一起来了解下双抗夹心法、间接法、竞争法。双抗体夹心法测抗原：双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法，适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不...
需要准备好细胞所要用到的培养基和相关试剂,虽然所有的贴壁,半贴壁或者悬浮细胞处理方式差不多,但是不同的实验室培养条件和处理力度还有试剂的批间差这些问题存在,也会导致对细胞处理不当,或者环境的不适应而造成细胞的死亡。1）收到细胞,时间要镜检：观察细胞形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好,观察细胞密度,有疑议及时咨询提供细胞的技术人员。由于运输的时间或者温度的变化,很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样,主要是贴壁牢固问题。比如293T,平时...
小鼠骨髓与骨内膜间充质干细胞分析FlowCytometryAnalysisofMouseBoneMarrowａndEndosteumMesenchymalStromalCells摘要：骨髓间充质干细胞(MesenchymalStromalCells，MSCs)是骨髓中具有自我更新能力，和成骨、成软骨和成脂肪多向分化潜能的成体干细胞。MSC具有在体外形成纤维细胞集落(CFU-F)和在体内、外分化为骨、软骨和脂肪细胞的能力。本文以小鼠骨髓组织为例，使用5种一抗和1种二抗，介绍在骨...
CulturingofC57BL/6MouseEmbryonicStem(ES)CellLineC57BL/6老鼠胚胎干细胞系的体外培养AbstractUsingATCCESC57BL/6asanexample,itisshownherehowtoculturemouseembryonicstem(ES)cellline.Theclonalembryonicstemcellline#693ESC57BL/6wasderivedfromastrainC57BL/6J(B6)mo...
LentivirusProductionAbstractLentivirusisacommontoolusedtointroduceageneintomammalianorotheranimalcells.Thisprotocolistoproducelentivirusstocksfromhairpin-pLKO.1plasmid.MaterialsａndReagentsHairpin-pLKO.1vector(OpenBiosystems).Packagingvector...
细菌的流式检测FlowCytometricAnalysisofBacteria摘要：传统的细菌检测(如平板法和显微技术)耗时长、误差大、操作繁琐并且无法提供细菌种属和生物学状态信息。近年来，随着荧光染料、结构光学和流式细胞检测仪自身的不断发展，利用流式细胞术(FCM)检测细菌等微生物成为可能。与传统细菌检测方法相比，FCM具有灵敏、快速、精确、高效的优势，同时结合其多参数数据采集特点，FCM可提供多种细菌的生物学信息，在实验室研究、临床诊断、工业生产、环境监测等众多领域具应用...
病毒的流式检测FlowCytometricAnalysisofVirus摘要：流式细胞术(FCM)可通过分析受感染细胞来间接检测病毒或其抗原，然而该方法存在测量过程繁琐、耗时长、误差大等缺点。伴随FCM的不断发展，其检测范围已不再局限于细胞，目前已可利用流式细胞仪直接分析各类形态和基因组大小各异(直径范围：100~200nm)的病毒，如杆状病毒、带状疱疹病毒、HIV-1病毒等。跟病毒的其他检测方法相比，FCM法具有重复性好、简便快速、可获取多参数信息等优势。除此之外，FCM得...
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