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DNA的琼脂糖凝胶电泳实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。本实验学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本...
cDNA文库构建(字体说明：FANG-仿，DI-第,suan-酸)cDNA文库[原理]：cDNA文库不同于基因组文库，被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA。CDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。从而做cDNA克隆时应是先从获得mRNA开始，在此基础上，通过反转录酶作用产生一条与mRNA相互补的DNA链，然后除掉mRNA，以DI一条DNA链为模板复制出DI二条DNA链（双链）；再进一步把此双链插入原核或真核载体。cDNA文库的构建分为六个阶段：阶段1：反转录酶...
降落PCR(如有不明，可以咨询超博小凌)降落PCR（touchdownPCR），一种PCR技术，主要用于PCR的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得PCR难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效率过低，但退火温度过低则会使非特异扩增过多。实验材料:基因样品仪器、耗材:PCR仪实验步骤：1.反应体积为50μl。2.人CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系：CD137-pCDNA3质粒4μl，P1，P2各0.5μmol/L，MgCl22mmol/L，dNTP0...
普通PCR、原位PCR、反向PCR和反转录PCR的基本原理和操作步骤普通PCR1概述聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。DNA聚合酶（DNApolymeraseI）早于1955年发现，而较具有实验价值及实用性的KlenowfragmentofE.Coli则是于70年代的初期由Dr.H.Klenow所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性,因此不符合使用高...
目的基因PCR扩增产物的克隆[实验原理]1.PCR产物回收在高离子盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤去蛋白液和漂选液，将引物、核苷酸、蛋白酶等杂质去除，后用低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。2.T载体与PCR产物的连接源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载...
原位杂交实验1探针的设计与合成1)根据实验室已有的p8基因cDNA全长序列，用premierprimer5.0设计引物p81和p82，以卤虫cDNA为模板，PCR扩增得到346bp的产物，用Takara胶回收试剂盒回收纯化。引物编号引物序列长度p81TGCGGACGAAACAGGAAG18bpp82GCTCAAACAGTGATGCCAGT20bp2)目的片段克隆a.在无菌离心管中加入连接载体的各种成分，载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:8，根据凝胶电泳检测后的浓度及载体与片...
原位杂交实验1探针的设计与合成1)根据实验室已有的p8基因cDNA全长序列，用premierprimer5.0设计引物p81和p82，以卤虫cDNA为模板，PCR扩增得到346bp的产物，用Takara胶回收试剂盒回收纯化。引物编号引物序列长度p81TGCGGACGAAACAGGAAG18bpp82GCTCAAACAGTGATGCCAGT20bp2)目的片段克隆a.在无菌离心管中加入连接载体的各种成分，载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:8，根据凝胶电泳检测后的浓度及载体与片...
荧光原位杂交实验（FISH）荧光原位杂交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。1实验方法原理：荧光原位杂交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是...
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