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细胞/ 组织总RNA 提取试剂盒

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详细介绍

细胞/ 组织总RNA 提取试剂盒

FastPure® Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit

细胞/ 组织总RNA 提取试剂盒

纯度高: 获得的RNA纯度高,可直接用于下游纯度要求高的实验。

基因组残留少: 配有基因组DNA吸附柱和DNase膜上消化模块,可有效去除DNA污染。

简单快速: 无需配备其他试剂、无需酚氯FANG抽提、常温操作即可。

通用性强: 适用于多种不同类型的细胞、组织RNA的提取。

 

分别使用Vazyme #RC101和T公司同类试剂提取2 × 10个293T细胞总RNA,使用100 μl洗脱体积,取1 ul提取产物进行琼脂糖凝胶电泳。从图中可以看出,Vazyme #RC101提取RNA浓度高于T公司同类产品。

本试剂盒可从动物细胞或组织中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚/ 氯FANG抽提,全程仅需30 min。试剂盒中gDNA-Filter Columns能够有效的分离上清和组织裂解物并吸附去除gDNA,另外,试剂盒中配有DNase膜上消化模块,可有效去除DNA 污染;RNAPure Columns能高效的结合RNA,配以优化后的Buffer溶液,使得到的总RNA纯度高,无蛋白和其他杂质污染,可用于RT-PCR、Real-time PCR、芯片分析等多种下游实验。

组分

RC101-01 (50 rxn)

Buffer RL1

30ml

Buffer RL2

15ml

Buffer RW1

60ml

Buffer RW2

36ml

RNase-free ddH2O

10ml

Buffer RDD

6ml

DNase I, RNase-free

250 μl

gDNA-Filter Columns (each in a 2 ml Collection Tube)

50 

RNAPure Columns (each in a 2 ml Collection Tube)

50 

RNase-free Collection Tubes 1.5 ml

50

DNase I置于-20℃保存;

Buffer RL1在加入β-巯基乙醇后,可在4℃保存1个月;

其余组分均可在常温(15-25℃)干燥条件下保存。

细胞/ 组织总RNA 提取试剂盒

 

Q1:RNA提取得率低。

A1:(1) 样本保存不当或者样本保存时间过久。样本保存不当或者保存时间过长都有可能导致RNA的降解,采集新鲜样本或经过液氮速冻后保存于-70℃或液氮中的样本。

(2) 匀浆或者液氮研磨不充分。匀浆或者液氮研磨不充分,裂解不充分,导致RNA的释放不充分。

(3) 组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中 RNA 的丰度不同,需做预实验确定合适的样品起始量。

(4) 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低或质量下降。

(5) 洗脱不充分。RNase-free ddH2O滴加到纯化柱膜中央。纯化柱的洗脱体积为50-200 μl,若洗脱效果不理想,可以加入在65℃预热的RNase-free ddH2O后,延长室温放置时间,离心后进行第二次洗脱。

Q2:gDNA-Filter Columns堵塞问题。

A2:(1) 样品用量太多。本试剂盒适用于提取10-20 mg动物组织或者2-5×106个细胞,超量的组织会降低产量以及纯度,操作时应减少样本使用量。

(2) 样品富含肌纤维。肌肉、心脏以及皮肤等富含肌纤维,肌纤维的分子量大,会引起柱子堵塞,样本处理时采用液氮研磨方式会降低堵柱现象。

(3) 组织研磨或者匀浆不充分。研磨或者匀浆不充分时,碎片有可能导致柱堵塞,将裂解后的液体先进行 13,000×g 离心5 min,取上清再加入gDNA-Filter Columns。

Q3:RNA降解。

A3:纯化后的RNA降解与样本质量、是否被RNase污染、操作方式等因素有关:

(1) 样本因为没有及时保存,导致RNA降解。组织样本或者细胞在收集后若不及时进行后续实验,液氮速冻后于-80℃保存。

(2) 样本反复冻融。组织样本保存时,分小块保存,避免因反复冻融导致样本降解。

(3) 电泳原因。常见的RNA降解现象部分因为电泳过程引起的,电泳前将电泳槽用3%双氧水浸泡20 min,之后用RNase-free ddH2O进行冲洗,电泳缓冲液用RNase-free ddH2O配置。

(4) 确保提取过程中使用的枪头和离心管均为RNase-free。

Q4:提取的RNA有基因组DNA污染。

A4:不同种类组织细胞DNA、RNA含量相差很大,请勿超过20 mg组织和5×106细胞。如肝脏、脾脏和肾脏DNA含量丰富,请勿超过10 mg,否则会导致基因组残留过多。gDNA-Filter Columns能够有效去除体系中大部分DNA,如果下游实验对微量DNA十分敏感,可根据具体情况选择选择使用以下方案:

(1) 使用试剂盒提供的DNase I进行膜上消化清除DNA污染。

(2) 设计引物时选用跨内含子的引物,从而避免基因组DNA模板参与扩增反应。

(3) 逆转录时选择含有基因组去除模块的逆转录试剂。

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